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快速封閉液是一種即用型,高效快速應(yīng)用于 Western Blot 等實(shí)驗(yàn)的封閉液。封閉時(shí)間僅需 10 分鐘,效果優(yōu)于脫脂奶粉、BSA 、酪蛋白等傳統(tǒng)封閉液,獲得更高的信號,更低的背景值,信噪 比高。該試劑不含有哺乳動(dòng)物來源的蛋白成分,避免與抗體發(fā)生交叉反應(yīng),適用于磷酸化的抗體,但不可用于生物素標(biāo)記的抗體。
R即用型封閉液,無需配制
R封閉時(shí)間短,僅需 10 分鐘
R背景低,信噪比高,優(yōu)于常規(guī)奶粉等封閉的效果
R不含哺乳動(dòng)物來源的蛋白,適用于磷酸化的抗體
1.完成轉(zhuǎn)膜后,將膜移入到平皿或者其他適合的容器中(可以不洗滌膜)。
2.根據(jù)膜的大小,加入適量體積的封閉液,需完全浸沒覆蓋膜,對于 7.5x 8cm 的膜推薦使用量 5-10ml。
3.置于水平搖床上,室溫條件下振蕩孵育 10 分鐘。
4.取出封閉完成的膜,用洗滌液沖洗蛋白膜 2-3 次,即可用于一抗孵育等后續(xù) western blot 實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng):
1. 通常用于 PVDF 膜或 NC 膜的封閉時(shí)間為 10 分鐘。對于背景低的抗體,可以縮短到 5 分鐘,而對于一些背景 非常高的抗體,可以嘗試將封閉時(shí)間延長為 30-60 分鐘。
2. 沒有任何一種封閉液是適用于所有實(shí)驗(yàn)體系的,因此對于一些特殊的實(shí)驗(yàn)或抗體,可能需要具體情況考慮使用其它更合適的封閉液, 比如奶粉、BSA 等封閉試劑。
3. 信號弱或者無信號:有可能是上樣量不足;轉(zhuǎn)膜效率低;抗體效價(jià)低,特異性差等原因造成,需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行調(diào)整
4. 背景高:有可能是抗體使用量過多;蛋白膜洗滌時(shí)間不足;抗體和封閉液發(fā)生交叉反應(yīng);試劑或儀器設(shè)備被污染等原因造成,需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況進(jìn)行調(diào)整
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