lip2000高效DNA TR是一種新型的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑適合于將核酸DNA轉(zhuǎn)染入真核細胞，  具有低細胞毒性；對多種類型的細胞和培養(yǎng)板都具有高轉(zhuǎn)染效率；轉(zhuǎn)染時血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點。

lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染試劑對于 常見的哺乳動物細胞具有非常高的轉(zhuǎn)染效率、重復性好、  操作簡單、無明顯的細胞毒性 ，并且對于貼壁細胞和懸浮 細胞都適用。

lip2000高效DNA TR主要適用于DNA 等單一成分的細胞轉(zhuǎn)染。

lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染過表達質(zhì)粒后，通常 24-48 h 后達到較高的蛋白表達水平， 并且很  多情況下蛋白表達量在轉(zhuǎn)染后 48 h 顯著高于轉(zhuǎn)染后 24 h；

lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染細胞時， 基   本不受細胞培養(yǎng)液中血清影響， 即可以在血清存在的情況下  進行細胞轉(zhuǎn)染。但為了取得最佳的轉(zhuǎn)染效果，推薦轉(zhuǎn)染時使用

不含抗生素培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染后不必去除轉(zhuǎn)染液，或者改變或添加培養(yǎng)基，但轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可去除轉(zhuǎn)染液。

使用方法

DNA 轉(zhuǎn)染

對大多數(shù)細胞來說， DNA(μg)與lip2000高效DNA TR (μl) 的比例為1:2~1:3。轉(zhuǎn)染時高的細胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染 效率和表達水平，并能減少細胞毒性。

1.  以24孔板為例

貼壁細胞：轉(zhuǎn)染前一天，用500μl不含抗生素的培養(yǎng)基接種0.5～2×105細胞，使之第二天能達到80-90%融合。

懸浮細胞：在準備DNA-TRLIP2000DNA復合物之前，用500μl不含抗生素的培養(yǎng)基接種4～8×105細胞即可。

2.  對每個轉(zhuǎn)染樣品，進行以下操作

a.在eppendorf管里分別加入50μlOpti-MEMIReLipcedSerumMedium和0.8μgDNA輕柔混勻（不能渦旋或離心），制成DNA稀釋液。

b.在另一個eppendorf管里分別加入50μlOpti-MEMIReLipcedSerumMedium和2.0μllip2000高效DNATR(注意用前先混勻)，輕柔混勻，制成lip2000高效DNATR稀釋液，室溫靜置5分鐘。

c.將DNA稀釋液和lip2000高效DNATR稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置20分鐘，形成DNA-lip2000高效DNATR復合物。DNA-lip2000高效DNATR復合物在室溫下可穩(wěn)定存在6小時。

3.  將DNA-lip2000高效DNATR復合物加入到接種好的細胞中，將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動，使復合物分散均勻。

4.  在37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時后更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)18～48小時。

5.  如果要篩選穩(wěn)定細胞株，則在轉(zhuǎn)染24小時后將細胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中，第二天加入選擇性培養(yǎng)基進行篩選。

優(yōu)化 DNA 轉(zhuǎn)染

質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化 為達到最高的轉(zhuǎn)染效率和降低細 胞毒性的影響， 可以對DNA和lip2000高效DNA TR的比例以及細 胞密度進行優(yōu)化， 一 般在1:0.5~1:5的范圍內(nèi)優(yōu)化DNA   (μg)和lip2000高效DNA TR (μl) 的比例。

注意事項

1.  使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。

2.  轉(zhuǎn)染前細胞必須處于良好的生長狀態(tài)。

3.  需自備不含抗生素的無血清培養(yǎng)液或 Opti-MEM?培養(yǎng)液 或普通的 DMEM 培養(yǎng)液。

4.  lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染試劑不能vortex 或離心，宜緩慢晃動混勻。

5.  轉(zhuǎn)染試劑使用后請立即蓋好蓋子，避免長時間暴露空氣中。

6.  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。