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KEIris RT mix with dsDNase(All-in-One)是將 RNA 合成cDNA 的一個操作更為簡便的系統(tǒng),含有第一鏈 cDNA 合成所需的全部試劑,僅需加入 RNA 模板和水即可進行逆轉錄反應,操作非常方便。使用該逆轉錄預混液 15 分鐘內最長可獲得12 kb 大小的cDNA。合成的cDNA 推薦用于qPCR 反應。該預混液采用特制的高效 dsDNase,該酶具有熱敏感性, 可在高溫條件下快速不可逆地失活,因此僅需一次加樣,即可同管進行去除基因組 DNA 污染與逆轉錄反應,與使用DNase I 去除基因組 DNA 污染相比,無需額外加入 EDTA 進行失活,不僅減少了對 RNA 模板的損傷、降低 RNase 污染風險,而且節(jié)省實驗時間。
1. RNA 模板的純度和完整性是影響逆轉錄效果的重要因素, 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等雜質會使 RNA 降解。
2. 若后續(xù)實驗為 qPCR,逆轉錄產物的加量應不超過 PCR 體系終體積的 1/10,如 20 μL 的 PCR 反應體系,逆轉錄產物的加量應不超過 2 μL。
3. 預混液中已經(jīng)包含 Oligo(dT)20VN 和隨機引物,不僅適用于包含 Poly(A) 結構的真核生物 mRNA,也適用于不含Poly(A)結構的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板,但不適用于 miRNA 等小 RNA 模板。